徠卡顯微鏡包裹的目的是為了防止超薄切片在制備過程中被破壞。這一步對于顯微鏡分散的細(xì)胞樣品尤其必要。
顯微鏡用于包裹的物質(zhì)有明膠,白蛋白,甲基纖維素、蔗糖等。
下面以白蛋白為例,說明其具體方法:
1、在一聚乙烯塑料管中加入牛血清白蛋白(BSA),BSA溶于0. lmol/L的磷酸緩沖液中,pH7,濃度為10%^-20%。
2、將經(jīng)固定的組織塊表面的殘余液體用濾紙吸干,并迅速投入BSA中。
3、顯微鏡一面振動(dòng)塑料管,一面向其中逐滴加入25%的戊二醛,使管中戊二醛的終濃度為2.5%。
4、在上述條件下,BSA約在半分鐘左右即可被戊二醛交連(聚合),顯微鏡用保險(xiǎn)刀片將塑料管壁切除。把聚合的BSA切成小方塊,使其大小略大于包埋于其中的組織塊。
如果樣品是游離細(xì)胞,可按下述步驟包裹:
1、將BSA加入一離心管內(nèi),顯微鏡濃度與上同;
2、把經(jīng)過固定的細(xì)胞轉(zhuǎn)入離心管;
3、在冷凍離心機(jī)上離心10分鐘,800g, 40C;
4、去掉上清,數(shù)碼顯微鏡在管底沉淀上加一滴用0. lmol/L磷酸緩沖液配制的10%的戊二醛,使殘余的BSA交連;
5、用針把聚合后的團(tuán)塊撥起,切成小塊。
為防止顯微鏡冷凍時(shí)生成大的冰晶而使結(jié)構(gòu)破壞,組織需經(jīng)冷凍保護(hù)劑處理,常用的冷凍保護(hù)劑有甘油(30%),DMSO (20%)和蔗糖(2.3mol/L),均用緩沖液配制,顯微鏡組織在冷凍保護(hù)劑中浸泡的時(shí)間為0.5-1小時(shí)(室溫)或過液((400)
為防止大的冰晶產(chǎn)生,數(shù)碼顯微鏡除使用冷凍保護(hù)劑外,應(yīng)采取速凍的辦法,其基本要求與具體作法和冷凍斷裂與蝕刻時(shí)相同,即將經(jīng)數(shù)碼顯微鏡冷凍保護(hù)的組織塊投入用液氮冷卻的氛里昂12內(nèi)。
徠卡顯微鏡機(jī)械維護(hù):
使用防塵罩是保證顯微鏡處于良好機(jī)械和物理狀態(tài)的重要的因素。外殼如有污跡,能用乙醇或肥皂水來清潔(無用其他有機(jī)溶劑來清潔),但切勿讓這些清洗液滲入內(nèi)部,造成內(nèi)部電子部件的短路或燒毀。
保持使用場地的干燥,盡管每臺(tái)徠卡顯微鏡均采用了特殊的防霉處理工藝,但當(dāng)它長期工作在濕度較大的環(huán)境中的話,還是容易增加霉變的幾率,因此如顯微鏡不得不工作在這些濕度較大的環(huán)境中,建議使用去濕機(jī)。
另外,如發(fā)現(xiàn)光學(xué)元件表面有霧狀,霉斑等不良情況時(shí),請立刻聯(lián)系徠卡專業(yè)人士,對您的儀器進(jìn)行專業(yè)維護(hù)保養(yǎng)。
建議
采取下列措施,或許能更好的延長您的顯微鏡使用時(shí)間并使之保持良好的工作狀態(tài)。
(1)每次關(guān)閉電源前,請將燈光調(diào)至暗。
(2)關(guān)閉電源后,請等燈箱*冷卻后(約15分鐘后),在罩上防塵罩。
(3)開啟電源后,若暫時(shí)不使用,可以將燈光調(diào)至暗,而無需頻繁開關(guān)電源。
顯微鏡工作一年后,應(yīng)該每年至少做一次的專業(yè)維護(hù)保養(yǎng)。